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“腸道護衛菌”——雙歧桿菌的分離、培養及鑒定分享

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一、雙歧桿菌到底長什么樣

雙歧桿菌,顧名思義,首先它是桿菌(桿菌?自己先腦補一下棍子的樣子),而且是革蘭氏陽性桿菌(革蘭氏陽性菌最顯著的特點是細菌被革蘭染色后在顯微鏡下呈紫色)。而由于其末端常常分叉,故名為雙歧桿菌。雙歧桿菌肉眼是無法看到的,所以我們只能借助顯微鏡來看清它真實的面目。

雙歧桿菌是1899年由法國Tissier博士從母乳營養兒的糞便中分離出的,不運動、無芽孢、形態多變的桿菌。最適生存溫度為(3742)℃,最適pH6.57.0,廣泛存在于人和動物的消化道、口腔等環境中。

二、雙歧桿菌對人類的作用

這么微小的,需要借助顯微鏡才能看到的雙歧桿菌到底對人類有什么用?

雙歧桿菌是一種重要的腸道有益微生物。其作為一種生理性有益菌,對人體健康具有生物屏障作用、營養作用、免疫增強作用、改善胃腸道功能等多種重要的生理功能。雙歧桿菌數量的多少,是判斷人體健康的晴雨表。

不僅僅如此,雙歧桿菌還能抑制人體有害細菌的生長,抵抗病原菌的感染,合成人體需要的維生素,促進人體對礦物質的吸收,促進排便、凈化腸道環境、刺激人體免疫系統等,對促進人體健康發揮重要作用。

三、雙歧桿菌的檢測方法

既然它這么重要(so important),又這么微小(so small),那我們如何在平時食用的食品中檢測它的存在?下面簡述雙歧桿菌的選擇性篩選和鑒定方法。

1、樣品制備

1.1 樣品的全部制備過程均應遵循無菌操作程序。

1.2 以無菌操作稱取25gmL)樣品,置于裝有225mL生理鹽水的滅菌錐形瓶內,制成1:10 的樣品勻液。

2、稀釋及涂布培養步驟

2.1 1mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1.0mL,沿管壁緩慢注于裝有9mL 生理鹽水的無菌試管中(注意吸管尖端不要觸及稀釋液),振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成1:100的樣品勻液。

2.2 另取1mL無菌吸管或微量移液器吸頭,按2.1操作順序,做10 倍遞增樣品勻液,每遞增稀釋一次,即換用1 1mL滅菌吸管或吸頭。

2.3 根據待鑒定菌種的活菌數,選擇三個連續的適宜稀釋度,每個稀釋度吸取0.1mL 稀釋液,接種在雙歧桿菌瓊脂平板或MRS瓊脂平板,或取0.1mL適當稀釋度的樣品勻液均勻涂布在雙歧桿菌瓊脂平板或MRS瓊脂平板。36℃±1℃厭氧培養48h±2h,可延長至72h±2h



雙歧桿菌在MRS篩選平板上的菌落形態

 

3、純培養

挑取3個或以上的單個菌落接種于雙歧桿菌瓊脂平板或MRS瓊脂平板。36 ℃±1℃厭氧培養48h±2h,可延長至72h±2h

4、菌種鑒定

4.1 涂片鏡檢:挑取雙歧桿菌平板或MRS平板上生長的雙歧桿菌單個菌落進行染色。雙歧桿菌為革蘭氏染色陽性,呈短桿狀、纖細桿狀或球形,可形成各種分支或分叉等多形態,不抗酸,無芽孢,無動力。

 

雙歧桿菌在顯微鏡下的形態觀察

4.2 生化鑒定

過氧化氫酶試驗為陰性。選取純培養平板上的三個單個菌落,分別進行生化反應檢測,不同雙歧桿菌菌種主要生化反應見國標附錄B

 

四、應用討論

 

雙歧桿菌在人類食品、醫藥和保健等領域已經得到較廣泛的應用,而在動物或畜禽等應用相對有限。限制其應用的主要因素包括:菌株來源不明確,黏附特異性和定植效率低;對氧氣和溫度環境敏感,耐氧性及穩定性低,不利于生產和實際應用;發酵條件要求高,發酵水平低,工業生產成本壓力大等。因此,篩選具有良好技術性能,包括耐氧、耐熱、耐酸耐膽鹽及良好發酵性能菌株對后期生產和應用具有重要意義。

 

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